超微量分光光度計(jì) | DS-11與核酸定量

更新時(shí)間：2021-10-21

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核酸定量

核酸（nucleic acid）是含有磷酸基團(tuán)的重要生物大分子，包括核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）。因最初從細(xì)胞核分離獲得，又具有酸性，故稱為核酸。但凡有生命的地方就有核酸存在，即使是比細(xì)菌還小的病毒也含有核酸。核酸是生物遺傳信息的載體，是構(gòu)成基因和表達(dá)的物質(zhì)基礎(chǔ)，是合成蛋白質(zhì)、組成細(xì)胞的重要生理活性物質(zhì)，支配著生命從誕生到死亡的全過(guò)程。

核酸不僅與正常生命活動(dòng)如生長(zhǎng)繁殖、遺傳變異、細(xì)胞分化等有密切關(guān)系，而且與生命的異常活動(dòng)如腫瘤發(fā)生、輻射損傷、遺傳病、代謝病、病毒感染等也息息相關(guān)。因此核酸研究是現(xiàn)代生物化學(xué)、生物分子學(xué)與醫(yī)藥學(xué)發(fā)展的重要領(lǐng)域，隨著分子生物學(xué)的廣泛應(yīng)用，核酸定量已經(jīng)成為一種常規(guī)化的實(shí)驗(yàn)手段。

核酸定量，包括雙鏈 DNA (dsDNA)、單鏈 DNA (ssDNA) 和 RNA 定量，是生命科學(xué)研究中的主要過(guò)程，需要在后續(xù)實(shí)驗(yàn)之前了解樣品濃度。準(zhǔn)確定量核酸濃度對(duì)于下一代測(cè)序、轉(zhuǎn)染、PCR 和克隆等下游實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。這些實(shí)驗(yàn)通常需要特定范圍的核酸濃度和純度以獲得最佳結(jié)果，而濃度的不準(zhǔn)確測(cè)定會(huì)導(dǎo)致較大偏大結(jié)果或者測(cè)定失敗。

DeNovix超微量光度計(jì)

Denovix，這一創(chuàng)造無(wú)耗材細(xì)胞計(jì)數(shù)神話的偉大pin pai，也曾創(chuàng)造了智能超微量光度計(jì)，于2013年，在美國(guó)市場(chǎng)正式發(fā)布銷售智能型DS-11/11+超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),其采用多點(diǎn)斜率技術(shù)，自動(dòng)感應(yīng)樣品濃度并自動(dòng)選擇最佳檢測(cè)光程技術(shù)，成功將超微量帶入智能時(shí)代。從獲得SelectScience質(zhì)量的久負(fù)盛名的白金印章，到全球用戶的評(píng)價(jià)高分，是全球科學(xué)家對(duì)DS-11產(chǎn)品易用性，服務(wù)和價(jià)值的充分信任。

作為一款靈敏的智能超微量光度計(jì)，DS-11采用SmartPath技術(shù)（US9442009B2），可自動(dòng)感應(yīng)樣品濃度并調(diào)節(jié)至最佳檢測(cè)光程，對(duì)于各種濃度的樣品都具備最高的檢測(cè)靈敏度和可靠性，斜率算法確保儀器終生精度，無(wú)需校準(zhǔn)，堪稱最新一代智能超微量光度計(jì)的*。

文獻(xiàn)分享

Pan等[1]在探究lncRNA JPX/miR-33a-5p/Twist1通過(guò)激活Wnt/β-catenin信號(hào)調(diào)控肺癌的腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移這一過(guò)程中即需要進(jìn)行定量RNA以便量化PCR。該研究成果最終發(fā)表在雜志MOLCULAR CANCER上，題目為“lncRNA JPX/miR-33a-5p/Twist1 axis regulates tumorigenesis and metastasis of lung cancer by activating Wnt/β-catenin signaling"(2020 Jan 15;19(1):9. doi: 10.1186/s12943-020-1133-9. IF=27.404)

摘要：

背景：MicroRNAs (miRNAs) 和 Twist1 誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (EMT) 可促進(jìn)癌細(xì)胞傳播這點(diǎn)已經(jīng)得到很好的證實(shí)，但長(zhǎng)鏈非編碼 RNA (lncRNAs) 在 Twist1 介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)中的作用尚未可知。

方法：通過(guò)RT-qPCR和蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)肺癌細(xì)胞系和組織中l(wèi)ncRNA JPX和Twist1的表達(dá)水平。通過(guò)蛋白質(zhì)印跡、挽救實(shí)驗(yàn)、集落形成試驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和異種移植動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，研究了 JPX 對(duì)肺癌細(xì)胞中 Twist1 表達(dá)、細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲、凋亡和體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響。

結(jié)果：我們觀察到 lncRNA JPX 在肺癌轉(zhuǎn)移組織中上調(diào)，并且與腫瘤大小和晚期密切相關(guān)。在功能上，JPX 在體外促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖并在體內(nèi)促進(jìn)肺腫瘤生長(zhǎng)。此外，JPX 通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性海綿 miR-33a-5p 上調(diào) Twist1，隨后誘導(dǎo) EMT 和肺癌細(xì)胞侵襲。有趣的是，JPX 和 Twist1 在肺癌組織和細(xì)胞中協(xié)同上調(diào)。在機(jī)制上，JPX/miR-33a-5p/Twist1通過(guò)激活 Wnt/β-catenin 信號(hào)參與 EMT 進(jìn)程。

結(jié)論：這些發(fā)現(xiàn)表明 lncRNA JPX 是 Twist1 信號(hào)傳導(dǎo)的介質(zhì)，可使肺癌細(xì)胞易于轉(zhuǎn)移，并可能作為靶向治療的潛在靶點(diǎn)。

作者從肺組織和細(xì)胞中分離得到總RNA，用DeNovix DS-11 分光光度計(jì)檢測(cè) RNA 的純度和濃度，以進(jìn)行后續(xù)的量化PCR。DeNovix DS-11可檢測(cè)到的RNA的下限低至0.60 ng/uL RNA。該設(shè)備能檢測(cè)RNA濃度的同時(shí)也能給出 260/280 和 260/230 比率，直接判斷RNA的純度，若樣品不純會(huì)直接給出警告指示。

Tips：A260nm是核酸最高吸收峰的波長(zhǎng)，A280是蛋白質(zhì)和酚類物質(zhì)最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，純DNA的A260/A280=1.8,純RNA的A260/A280=2.0，若＜1.8或2.0，則表示樣品受到蛋白質(zhì)（芳香族）或酚類物質(zhì)的污染，需純化樣品。

除了RNA，DS-11還能檢測(cè)DNA和蛋白質(zhì)等，檢測(cè)下限0.75 ng/uL dsDNA和0.04 mg/mL BSA，上限為37500 ng/uL dsDNA 或 1125 mg/ml BSA 蛋白。紫外-可見(jiàn)分光光度法和熒光法是核酸定量的常用方法，兩者可視為對(duì)比且互補(bǔ)的樣品定量方法。

DeNovix超微量光度計(jì)結(jié)合吸光度和熒光檢測(cè)與一身，具備優(yōu)秀的精確度、靈敏度、特異性和易用性，小巧輕便，方便移動(dòng)、戶外研究作業(yè)。并且擁有多個(gè)型號(hào)，不同型號(hào)擁有不同配置，適用于超廣研究方向和使用者群體。

Denovix超微量主要特點(diǎn)>>

1、主機(jī)超微量模式始終如一的精度、終身免校。zhuan li的SmartPath和Bridge testing技術(shù)保駕護(hù)航。

2、無(wú)論是微量模式還是紫外熒光一體式：測(cè)量樣品的濃度范圍最寬，上下限均是行業(yè)內(nèi)的翹首。

3、根據(jù)樣品濃度不同，自動(dòng)變換測(cè)量光程。受zhuan li保護(hù)(US9442009B2)。超微量模式：0.02mm自動(dòng)變換至0.5mm。

4、污染物分析功能SmartQC，污染物種類鑒定報(bào)告。提示污染物，結(jié)合熒光模塊檢測(cè)。

5、微量模式下，蛋白質(zhì)濃度無(wú)限制準(zhǔn)確測(cè)量。無(wú)需稀釋至比色皿，微量即可檢測(cè)高濃度的蛋白質(zhì)。

6、wei一一款整合了熒光光度計(jì)的超微量，非常適用于疫苗生產(chǎn)企業(yè)的殘留檢測(cè)。